Rôle de Klebsiella oxytoca dans la diarrhée associée aux antibiotiques

Contexte On a récemment montré que Klebsiella oxytoca était l’agent causal de la colite hémorragique associée aux antibiotiques. Comme il n’est pas clair si K oxytoca cause aussi des diarrhées non hémorragiques associées aux antibiotiques, notre étude a étudié une association possible entre K oxytoca et ce trouble. ont été recrutés dans 4 groupes d’étude: 1 groupe de patients AD qui ont reçu des antibiotiques et ont souffert de diarrhée; n = 107, 2 patients du groupe AD – qui ont reçu des antibiotiques mais n’ont pas souffert de diarrhée; n = 93, 3 patients du groupe A-D qui ont présenté une diarrhée aiguë mais n’ont pas reçu d’antibiotiques; n = 60 et 4 patients du groupe A-D sans diarrhée qui n’ont pas reçu d’antibiotiques; n = 111 échantillons de selles ont été étalés sur gélose MacConkey et K oxytoca a été identifié en utilisant un kit de test standard Clostridium difficile a été détecté par un test d’antigène A / B toxine K souches d’oxytoca ont été testés pour la cytotoxicité avec des tests de culture cellulaire. échantillons de selles, K souches d’oxytoca ont été isolées pendant la période étudiée Il n’y avait pas de différence significative dans la distribution de K oxytoca parmi les 4 groupes d’étude Six des 15 souches étaient productrices de toxines Trois des souches productrices de toxines provoquaient des colite hémorragique Aucun cas de diarrhée non hémorragique associée à un antibiotique due à la K oxytoca productrice de toxine n’a été détecté. Conclusion K oxytoca n’est pas l’agent causal de la diarrhée non hémorragique associée aux antibiotiques Ceci contraste avec l’entité clinique distincte de la colite hémorragique associée aux antibiotiques. l’oxytoca n’est donc justifié que chez les patients qui souffrent de diarrhée sanglante au cours d’un traitement antibiotique

Dans les cas graves, il peut être une cause importante de morbidité et de mortalité, en particulier chez les patients âgés hospitalisés. Les mécanismes par lesquels les antibiotiques conduisent à la diarrhée associée aux antibiotiques sont divers, allant des effets pharmacologiques sur la motilité intestinale. perturbation de la fonction de la flore intestinale indigène et prolifération par des microorganismes pathogènes [1] Clostridium difficile est le micro-organisme pathogène le plus commun à causer la diarrhée associée aux antibiotiques, bien qu’il ne représente que 10% -20% de tous les cas [2] le spectre clinique de la maladie associée au C difficile va de la diarrhée sans colite à la colite pseudomembraneuse associée aux antibiotiques et à la colite fulminante [2] La colite hémorragique associée aux antibiotiques La MCAA est une forme distincte de diarrhée associée aux antibiotiques, dans laquelle aucun C difficile n’est détecté. caractérisée par l’apparition soudaine de la diarrhée sanglante au cours de l’antibiotique thera py, souvent en combinaison avec des crampes abdominales sévères [3] A l’endoscopie, la principale caractéristique macroscopique de l’AAHC est la distribution segmentaire de l’hémorragie muqueuse et de l’œdème des muqueuses localisées principalement dans le côlon droit Récemment, Klebsiella oxytoca produisant des toxines a été identifié comme cette entité pathologique [3] Il a également été suggéré que K oxytoca est associé à une colite sévère sans antibiothérapie préalable [4, 5] et à l’aggravation de la maladie de Crohn [6] Kytytoca joue un rôle dans le développement d’antibiotiques non hémorragiques. Le but de notre étude était d’élucider la pertinence pathogénique de K oxytoca chez les patients adultes atteints de diarrhée associée aux antibiotiques et d’établir si des tests de routine pour K oxytoca sont justifiés chez ces patients Des échantillons de selles ont été cultivés pour isoler K oxytoca de patients atteints de diarrhée associée aux antibiotiques et de sujets témoins acuité. En outre, les isolats de K oxytoca pour la production de cytotoxines

Patients et méthodes

Sélection des patients Les patients de l’étude ont été recrutés dans un service de médecine interne de 280 lits dans un hôpital universitaire de novembre 2006 à février 2008. Les patients ont été inclus une seule fois pendant leur hospitalisation et ont toujours fourni leur consentement éclairé. Les patients ont été interrogés pendant les tournées cliniques pour la présence de diarrhée, de diarrhée ou d’un traitement antibiotique associé aux antibiotiques en l’absence de diarrhée. Le traitement antibiotique a été défini comme la réception de tout antibiotique oral ou intraveineux à des doses thérapeutiques pour ⩾1 jour, comme décrit ailleurs [7] La ​​diarrhée associée aux antibiotiques a été définie comme ⩾3 selles molles ou aqueuses par jour pendant ou aussi longtemps que 2 mois après le traitement antibiotique [8] Un total de 371 patients répondant aux critères d’inclusion ont été recrutés. groupes d’étude: 1 107 patients consécutifs qui ont reçu un traitement antibiotique et une diarrhée expérimentée AD, 2 93 pat les patients ayant reçu un traitement antibiotique pendant au moins 3 jours mais n’ayant pas présenté de diarrhée; 3 60 patients n’ayant pas reçu de traitement antibiotique mais ayant présenté une diarrhée aiguë A-D et 4 111 patients n’ayant pas reçu d’antibiotiques et n’ayant pas souffert de diarrhée A-D- Les patients ayant présenté une diarrhée sanglante ont été évalués par endoscopie à la discrétion du clinicien traitant. Les patients recevant un traitement antibiotique en raison de suspicion de diarrhée bactérienne aiguë, à savoir la diarrhée due à Salmonella, Shigella, Campylobacter ou Yersinia, ont été exclus. 1 des critères suivants ont été exclus de l’étude: maladie intestinale inflammatoire, intolérance au lactose, syndrome de l’intestin court, maladie hémato-encéphalique, chimiothérapie au cours des 2 mois précédents, chirurgie abdominale au cours des 2 derniers mois ou hospitalisation en unité de soins intensifs les 30 derniers jours Les données démographiques, cliniques et de laboratoire ont été extraites de cha rts et bases de données informatisées Le diagnostic d’AAHC a été établi sur la base d’antécédents cliniques d’utilisation d’antibiotiques avant l’apparition d’une diarrhée sanglante et de résultats endoscopiques et histologiques typiques de la colite hémorragique segmentaire, selon les définitions publiées ailleurs [3] Des échantillons de selles ont été étalés sur des plaques de gélose MacConkey bioMérieux Les espèces de Klebsiella ont été identifiées en utilisant le test API 20E Des spécimens de selles bioMérieux ont été testés pour les toxines A et B du C difficile en utilisant un test de détection rapide Immunocard Toxins A & amp; B; Meridian Bioscience Des échantillons de selles provenant de patients du groupe AD ont également été cultivés pour des agents pathogènes intestinaux, notamment Salmonella, Shigella, Yersinia et Campylobacter sur des géloses sélectives Des échantillons de selles de patients du groupe A-D ont été cultivés pour Salmonella, Shigella, Yersinia et Campylobacter à la discrétion du clinicien Des échantillons de selles et des isolats bactériens ont été conservés à -70 ° C. Des cultures correspondantes ont été réalisées comme décrit ailleurs [7] sur des échantillons de selles positifs pour K oxytoca stockés à -70 °. 10 microgrammes de chaque dilution ont été transférés sur une plaque de gélose MacConkey et uniformément plaqués avec un tampon de verre stérile Après 24 h d’incubation à 37 ° C, les colonies suspectées ont été identifiées en utilisant l’API 20E, ont été comptées, et les unités formant des colonies CFU par mL d’échantillon de selles ont été calculées. Les effets cytotoxiques ont été évalués par l’examen microscopique de l’arrondi des cellules et la mort cellulaire et la méthode colorimétrique MTT tétrazolium, comme décrit ailleurs [3]. , 9, 10] Analyse statistique L’analyse statistique a été réalisée en utilisant le test V de Cramer et le test de Mann-Whitney, le cas échéant, avec l’utilisation du logiciel SPSS, la valeur SPSS de la version 90 SPSS de × 05 a été considérée comme significative

Résultats

Groupe AD Dans le groupe AD n = 107, 89 patients ont présenté une diarrhée non sanglante. 1 K oxytoca n’a pas été détecté dans les échantillons de selles de l’un de ces 89 patients. Dix-huit patients du groupe AD ont présenté une diarrhée sanglante. Au cours de l’endoscopie, l’AAHC a été diagnostiquée macroscopiquement chez 3 des 18 patients ayant présenté une diarrhée sanglante. Le diagnostic d’AAHC a été confirmé histologiquement dans tous les cas, comme décrit ailleurs. [3] K oxytoca produisant des toxines Figure 1 Un patient ayant eu une diarrhée sanglante dans le groupe AD a présenté K oxytoca, qui présentait des résultats négatifs à la toxine. Des cultures quantitatives de selles ont révélé un statut de transporteur de bas niveau de K oxytoca, avec × 10 UFC / mL de toxine C difficile a également été détectée dans les selles de ce patient, et la coloscopie a révélé une colite pseudomembraneuse d Les données cliniques de tous les patients sont résumées dans le tableau 1

Figure 1View largeDownload slidePatients dans le groupe AD n = 107, organisé en fonction de leurs symptômes et des résultats positifs pour la présence de Klebsiella oxytoca et de sa toxine Figure 1Voir largePatients de diapositive dans le groupe AD n = 107, organisés en fonction de leurs symptômes et résultats positifs présence de Klebsiella oxytoca et de sa toxine

Les résultats des cultures pour les espèces de Klebsiella sont présentés dans le tableau 2 Un total de 15 souches d’oxytoca K ont été isolées au cours de la période étudiée Il n’y avait pas de différence significative dans la distribution de K oxytoca. et d’autres espèces de Klebsiella Klebsiella pneumoniae et Klebsiella terrigena parmi les 4 groupes L’inclusion des cas AAHC n’a eu aucun impact sur l’analyse

Tableau 2View largeDownload slidePrevalence des espèces de Klebsiella et Clostridium difficile dans les échantillons de sellesTable 2View largeDownload slidePrévalence des espèces de Klebsiella et Clostridium difficile dans les spécimens de sellesLes cultures d’espèces de Klebsiella quantitatives ont été réalisées avec des échantillons de selles prélevés sur K oxytoca. Les résultats des cultures quantitatives sont présentés dans le tableau 3 La quantité de K oxytoca dans les cultures quantitatives était significativement plus élevée chez les patients avec AAHC que chez tous les autres groupes combinés P = 038 Pour cette analyse, des valeurs de × 10 UFC / mL, voir le tableau 3, ont été remplacées par 9 UFC / mL, pour prendre la plus grande quantité possible de K oxytoca × 10

La production de toxine et la quantité de Klebsiella oxytoca détectée dans les échantillons de selles des patients La production de toxine dans les isolats de K oxytoca est présentée dans le tableau 3 des 4 isolats d’O. Les autres isolats de K oxytoca provenant de patients du groupe AD ne produisaient pas de toxineAutres agents pathogènes intestinaux La distribution de la toxine C difficile était significativement différente entre les 4 groupes, avec les taux les plus élevés de toxicité. Dans ce groupe, 11% des patients avaient des résultats positifs à la toxine C difficile dans leurs échantillons de selles. Dans le groupe AD, les espèces Salmonella, Shigella, Yersinia et Campylobacter n’ont été détectées dans aucun échantillon de selles. Dans le groupe A-D n = 60, des espèces de Salmonella ont été détectées dans les échantillons de selles de 4 patie nts, ​​alors que 3 étaient positifs pour les espèces de Campylobacter Chez 37 patients de ce groupe, aucun agent pathogène diarrhéique n’a été détecté Seize patients de ce groupe n’ont pas été testés pour des pathogènes bactériens autres que K oxytoca et C difficile

Discussion

Le K oxytoca a récemment été identifié comme étant l’agent causal de l’AAHC, une forme distincte de diarrhée associée aux antibiotiques dans laquelle le C difficile est absent. [3] Si K oxytoca joue un rôle dans la diarrhée non hémorragique associée aux antibiotiques n’a pas été étudiée jusqu’à présent. étude, il n’y avait pas de différence significative dans la distribution des espèces de K oxytoca dans les 4 groupes d’étude, démontrant que K oxytoca n’est pas associé à la diarrhée non hémorragique associée aux antibiotiques Bien que 371 patients aient été étudiés, cette conclusion doit être interprétée avec prudence. La prévalence de K oxytoca était faible dans tous les groupes d’étude. Dix-huit patients du groupe AD ont présenté une diarrhée sanglante. Trois de ces 18 patients ont reçu un diagnostic d’AAHC par endoscopie et K oxytoca, une toxine, a été isolé dans trois échantillons. notre étude a connu une soudaine apparition de diarrhée sanglante en combinaison avec des crampes abdominales au cours d’un traitement antibiotique avec l’amoxicilline-c le lavulanate, similaire à ce qui a été rapporté ailleurs [3] La prise concomitante d’anti-inflammatoires non stéroïdiens, qui a été considéré comme un cofacteur étiologique de l’AAHC [3], a été vérifiée chez les 3 patients. , K oxytoca a été isolée à partir de l’échantillon de selles d’un seul autre patient du groupe AD Cet isolat n’a pas produit de cytotoxine et le patient a reçu un diagnostic de colite pseudomembraneuse liée au C difficile Nos résultats indiquent que les tests de routine de K oxytoca dans les échantillons de selles Dans notre étude, la diarrhée associée aux antibiotiques a été causée par le C difficile chez 11% des patients, ce qui est cohérent avec d’autres études [2] Des espèces de Klebsiella ont été trouvées chez 15% des patients du groupe témoin. groupe A-D- Ce résultat est comparable à celui d’une autre étude réalisée dans une population néerlandaise en bonne santé âgée de 50-80 ans, qui a détecté l’espèce Klebsiella dans 12% des selles. échantillons [11] K oxytoca a été identifié chez 4% des patients de notre groupe témoin A-D-, ce qui est comparable aux autres résultats publiés récemment [3] Fait intéressant, seule une souche K oxytoca produisant des toxines a été trouvée dans le groupe témoin. -D- La culture quantitative de selles a révélé une faible concentration de ce pathogène dans l’échantillon de selles. Ce patient était considéré comme un porteur asymptomatique de K oxytoca produisant des toxines. Nous supposons que l’induction de la colite par K oxytoca est associée à une augmentation du nombre de colonies de cet agent pathogène déclenché par thérapie antibiotiqueDans le groupe A-D, 2 K isolats d’oxytoca ont été trouvés pour produire des toxines Dans 1 de ces patients patient 345, K oxytoca a été simultanément isolé d’un échantillon d’urine pendant la culture de routine K compte oxytoca, 1 × 106 CFU / mL isolat démontré aucune donnée sur la production de toxines non montrée Comme aucune autre cause de diarrhée n’a pu être établie, K oxytoca – avec une numération des colonies intestinales de 2 × 105 UFC / mL – aurait pu causer des pertes non sanglantes diarrhée chez ce patient sans traitement antibactérien précédent Dans l’échantillon de selles du deuxième patient, on a trouvé × 10 UFC / mL de K oxytoca, indiquant qu’il était extrêmement improbable que la diarrhée de ce patient soit causée par K oxytoca. de grandes quantités chez tous les patients ayant une numération moyenne d’oxytoca de type AAHC dans l’échantillon de selles, 36 × 106 UFC / mL dans notre étude, suggérant que l’administration d’antibiotiques modifie la flore intestinale indigène et favorise la croissance de K oxytoca. les microorganismes produisent apparemment de grandes quantités de cytotoxine, provoquant ainsi une colite hémorragique. On ne sait pas actuellement si les patients atteints d’AAHC sont colonisés par K oxytoca avant un traitement antibiotique, si l’antibiothérapie entraîne une prolifération de K oxytoca avec production de toxines ou si les patients nouvellement infecté par K oxytocaIl faut noter que la réception des fluoroquinolones était plus fréquente dans le groupe AD que dans groupe AD- Selon une étude récente [12], les fluoroquinolones de quatrième génération, les quinolones prédominantes utilisées dans notre étude, étaient évidemment associées à un risque plus élevé de diarrhée associée aux antibiotiques dans notre population d’étude. En conclusion, notre étude démontre que K oxytoca n’est pas associé à la diarrhée non hémorragique associée aux antibiotiques chez les patients adultes. Les tests de routine de K oxytoca ne sont donc justifiés que chez les patients souffrant de diarrhée sanglante au cours d’un traitement antibiotique

Remerciements

Nous remercions Christina Strempfl, Waltraut Eberharth et Bernadette Neuhold, pour leur expertise technique, et Herbert Schwetz, pour son avis. Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: no conflicts